Métodos para la determinación de Glucosa

MEDICIONES DE GLUCOSA

CONSIDERACIONES ACERCA DE LAS MUESTRAS

Las determinaciones de la glucosa son fundamentales en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades relacionadas con el metabolismo de los hidratos de carbono y se realizan en sangre total, plasma, suero, LCR. Liquido pleural y orina.

La sangre venosa es la muestra de elección para el análisis de glucosa. A temperatura ambiente la glucosa se metaboliza a una velocidad de 7 mg/dl/h y a 4°C. El índice de metabolización es mayor en presencia de contaminación bacteriana o leucocitosis. Una muestra de suero es válida para el análisis de glucosa si es separado de las células en un plazo de 30 minutos; no obstante, para tiempos superiores, debe añadirse un conservante como el fluoruro sódico para inhibir la glucolisis. En muestras de suero sin bacterias contaminadas o leucocitos, un retraso superior a 90 minutos en la separación del suero aun puede proporcionar resultados clínicos aceptables. La glucolisis en sangre total refrigerada puede retrasarse en un tiempo superior a 48 horas añadiendo 2mg de fluoruro sódico por mililitro de sangre.  En suero o plasma refrigerado, la glucosa permanece estable durante un periodo de 48 horas; en muestras almacenadas durante mas tiempo, aunque se encuentra a 20°C los valores de glucosa disminuyen de maner progresiva. Los aparatos caseros de monitorización de glucosa ayudan a los pacientes diabéticos a un mejor tratamiento de su enfermedad. Es fundamental un entrenamiento adecuado de los pacientes en el manejo de estos lectores individuales para evitar los errores inherentes al operador que según un estudio pueden llegar a afectar al 12% de los usuarios. Entre estos errores se incluyen la aplicación de un volumen insuficiente de muestra- el estrujamiento del dedo para adquirir sangre suficiente, el uso de tiras reactivas caducadas, factores ambientales, la utilización de aparatos que no funcionen correctamente, la presencia de un lector sucio y las determinaciones realizados fuera del rango de hematocrito o temperatura. El análisis también puede verse alterados por contacto con el área de reacción. Estos aparatos deben tener una seria de características, además de las prpias de su funcionamiento como: facilidad de uso, requerir un pequeño volumen de sangre, bajo mantenimiento, lectura fácilmente visible, rapidez alarmas apropiadas, memoria de resultados y escasas sustancias que interfieren con la técnica

MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA.

La mayoría de mediciones de glucosa se basan en métodos enzimáticos.

Estos métodos enzimáticos tienen gran especificidad y pueden ser adaptados para realizar determinaciones en los puntos de atención médica. Actualmente las determinaciones de glucosa se realizan mediante tres sistemas enzimáticos glucosa-deshidrogenasa, glucosa-oxidasa y hexocinasa. En algunos métodos la reacción produce una corriente eléctrica proporcional a la concentración inicial de glucosa, y en otros se toma un producto, medido espectrofotométricamente, que también es proporcional a la cantidad de analito.

Otros métodos se basan en el cálculo de la variación de velocidad inicial de reacción, que depende de la glucosa presente inicialmente, o bien puede tratarse de ensayos a punto final.

GLUCOSA-DESHIDROGENASA

En el método de la glucosa-deshidrogenasa, la glucosa es utilizada para reducir un cromóforo que permita ser medida espectrofotométricamente o para generar una corriente eléctrica. Con el examen se mira la cantidad (actividad) de esta sustancia en los glóbulos rojos.

GLUCOSA-OXIDASA

La glucosa-oxidasa es una flavoenzima que cataliza las reacciones descritas a continuación. La reacción de la peroxidasa puede medirse espectrofotométricamente, y se inhibe con concentraciones altas de ácido úrico, ácido ascórbico, bilirrubina, creatinina, dopamina, y ácido cítrico. Este sistema depende de la presión parcial de oxígeno, que compite con la reacción y produce peróxido de hidrogeno, por tanto, cuanto mayor sea esta presión parcial de oxígeno, la glucosa medida eléctricamente será más baja. La glucosa oxidasa también puede utilizarse en otros sistemas eléctricos.

HEXOCINASA

La prueba de la hexocinasa esta aceptada como el método de referencia para la determinación de glucosa. La concentración de glucosa es proporcional al índice de producción de NAD (P) H, medido espectrofotométricamente. Dependiendo de la fuente de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa, la enzima puede ser específica para el NAPD o utilizar además NAD. Las muestras hemolizadas pueden crear problemas, ya que el contenido liberado de los eritrocitos puede interferir en la relación estequiometria entre la glucosa y la acumulación de NAD (P) H.